技术资料

来自 : 发布时间：2024-05-05

X品牌 历史介绍:苏州蚂蚁淘生物科技有限公司，作为一家生命科学领域的高科技生物公司，目前代理销售二十多家欧美著名生物技术公司的产品，覆盖了免疫学、细胞生物学、分子生物学、药物筛选、生物制药、食品检测、疫苗生产等领域。

如何通过Chromotek公司GFP-Trap如何设计成功的IP实验？使用ChromoTekGFP-Trap®时如何计划GFP融合蛋白的免疫沉淀序言本文档提供有关如何应用ChromoTekGFP-Trap®进行免疫沉淀的实用信息。简介ChromoTekGFP-Trap®基于源自羊驼单可变域抗体（也称为VHH或纳米抗体）的GFP结合蛋白（图1）。当应用于免疫沉淀时，GFP-Trap具有特殊的性能，并提供了优于传统IgG抗体的一些优势。实验计划在计划使用ChromoTekGFP-Trap®进行感兴趣的GFP融合蛋白的免疫沉淀时，应考虑一些实验方面。下面，我们指导您完成每个步骤。共有3种矩阵：

特征	琼脂糖珠	磁性琼脂糖珠	磁珠
矩阵	琼脂糖，4％高度交联	琼脂糖，6％交联	无孔二氧化硅
颗粒尺寸	45-165微米	20-40微米	0.5-1微米
装订能力	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆2-3μg	每10μl珠浆0.5μg
磁性	没有	是	是

预清除：预清除是除去与固相支持物非特异性结合的蛋白质或DNA的可选步骤。它包括在用GFP-Trap进行实际的免疫沉淀实验之前，将细胞提取物与普通珠子（例如结合对照琼脂糖珠子）一起孵育。在成功进行预清除后，非特异性蛋白质或其他成分将不会与目标蛋白质共同纯化。CRAPome：从本质上讲，每个基质和结合分子都可能非特异性地结合某些蛋白质，从而导致蛋白质背景。科学家们在www.crapome.org上建立了基于互联网的数据库CRAPome。该数据库存储并标注了蛋白质组学研究社区生成的阴性对照。CRAPome有助于确定背景污染物，例如与固相支持物，亲和试剂或表位标签相互作用的蛋白质。特异性-GFP-Trap®捕获哪些荧光蛋白GFP-Trap®与大多数常见的GFP衍生物特异性结合：

荧光蛋白	GFP-Trap®		荧光蛋白	GFP-Trap®
（e）绿色荧光蛋白	√	（e）柠檬黄	√
标签GFP2	√	荧光蛋白	√
涡轮绿色荧光蛋白	--	超级文件夹GFP	√
三叶草	√	微蓝藻	√
YFP	√	pH值	√
CFP	√	GFP S65T	√
金星	√	--	--

ChromoTekGFP-Trap®仅结合正确折叠的活性GFP。据信这是因为纳米抗体结合了GFP的三维表位。纳米抗体细长的CDR3（互补决定区3）可进入蛋白质的裂口和酶促中心，这是常规抗体无法接近的，但会导致该GFP纳米抗体具有非常强的结合力和非常低的解离常数。因此，抗GFP纳米抗体不适用于蛋白质印迹中的蛋白质检测。对于GFP（融合蛋白）的Western印迹检测，ChromoTek建议使用传统抗体抗GFP抗体3H9（大鼠单克隆抗体，请参阅互补产品）。对照-我应该采取哪些对照来验证实验数据？下面根据应用找到一些建议：对于免疫沉淀（IP）：•用于GFP融合物IP的GFP-Trap®和不相关的Nano-Trap作为阴性对照，例如Myc-Trap®，GST-Trap或MBP-Trap对于蛋白质复合物AB的免疫共沉淀（Co-IP）：细胞裂解–准备细胞裂解液时要考虑什么？裂解缓冲液：•非变性裂解缓冲液适用于Co-IP，因为蛋白质将保持其天然构象•RIPA（放射免疫沉淀测定）缓冲液可能会使蛋白质变性或破坏蛋白质复合物抑制剂：•添加蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解！•保留蛋白质的翻译后修饰，并添加例如磷酸酶抑制剂！•通过将样品放在冰上来防止蛋白质降解！免疫沉淀– GFP融合蛋白的结合由于GFP结合蛋白与珠子表面共价偶联，因此GFP-Trap®珠子即可使用，可以直接添加到制备的裂解物中。GFP纳米抗体的亲和力在皮摩尔范围内，因此GFP融合蛋白的消耗可以在5到30分钟内完成。GFP-Trap®的缓冲液兼容性，可用于结合和洗涤GFP-Trap®与大多数洗涤缓冲液兼容，并在恶劣条件下稳定，包括：•最高1 M NaCl和8 M尿素•最高0.2％SDS和2％NP -40洗脱策略用竞争性肽代替GFP融合蛋白洗脱结合的GFP融合蛋白无效。此外，由于GFP-Trap®在变性条件下起作用，因此添加诸如尿素的离液化合物不会使GFP-融合蛋白键化。因此，我们建议用以下方法洗脱：•SDS（例如SDS样品缓冲液）是洗脱结合的GFP标签蛋白的非常有效的方法。洗脱导致变性的GFP融合物。•0.2 M pH值为2.5的甘氨酸可选地，您可以使用pH 2.5的甘氨酸洗脱。建议重复此洗脱步骤，因为pH转换洗脱不能完全起作用。重复将提高洗脱效率。非常重要：洗脱后不要忘记立即中和蛋白质！作为上述洗脱选择的替代方法，可以引入GFP与融合蛋白之间的蛋白酶切割位点。如果结合了不稳定的蛋白质或想要富集感兴趣的天然蛋白质，则建议使用此选项。此外，考虑您是否真的需要从微珠上洗脱目标结合蛋白，而不是在\"微珠”上进行下游分析：•仍与微珠偶联时可以消化蛋白质，以进行后续的质谱分析。•如果未阻断活性中心，则仍可与磁珠偶联时可以进行酶活性测定。可重复性GFP-Trap®是一条细小，可溶性和稳定的单多肽链，可在细菌中重组表达。这与质量控制相结合，使其生产稳定且可重复生产，从而获得可靠的结果。介绍纳米抗体及其应用的精选参考文献：纳米抗体作为体外和细胞内蛋白质动力学探针的Dmitriev，OY，Lutsenko，S.和Muyldermans，S.在：生物化学杂志，2015 – jbc-R115。使用荧光融合蛋白进行生化和功能研究的多功能纳米阱Rothbauer，U.，Zolghadr，K.，Muyldermans，S.，Schepers，A.，Cardoso，MC，Leonhardt，H. in：Mol Cell Proteomics，2008 Feb; 7 （2）：282-9。EPUB 2007年10月21日基于纳米抗体的产品作为研究和诊断工具De Meyer，T.，Muyldermans，S。和Depicker，A .：《生物技术趋势》，2014年5月；32（5）：263-270;用于免疫亲和纯化和免疫灌注色谱的单域抗体片段的有益特性Verheesen P.，Ten Haaft MR，Lindner N.，Verrips CT，de Haard JJW in：Biochim。生物物理学。Acta，2003；1624（1-3）：21-28一种用于活细胞单分子成像的高特异性金纳米探针Leduc，C.，Si，S.，Gautier，J.，Soto-Ribeiro，M.，Wehrle-Haller，B.，Gautreau，A.，.Giannone， G.，Cognet，L.＆Lounis，B.，in：纳米字母，2013：13（4），1489-1494。基于纳米抗体的染色质免疫沉淀。DUC，TN，Hassanzadeh-Ghassabeh，G.，Saerens，D.，Peeters的，E.，沙利耶，D.，＆Muyldermans，S.在：单结构域抗体：方法和协议，2013：491-505

产品名称	尺寸	码
GFP-Trap®A▶偶联琼脂糖珠	10 rxns（250µl树脂）	GTA-10
20 rxns（500µl树脂）	GTA-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	GTA-100
200 rxns（5ml树脂）	GTA-200
400 rxns（10毫升树脂）	GTA-400
GFP-Trap®A试剂盒▶GFP-Trap®A▶包括裂解液和洗脱缓冲液	20 rxns（500µl树脂）	gtak-20
GFP-Trap®MA▶偶联到琼脂糖磁珠上	10 rxns（250µl树脂）	gtma-10
20 rxns（500µl树脂）	gtma-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtma-100
200 rxns（5ml树脂）	gtma-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtma-400
GFP-Trap®MA试剂盒▶GFP-Trap®MA▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmak-20
GFP-Trap®M▶耦合到磁性颗粒	10 rxns（250µl树脂）	gtm-10
20 rxns（500µl树脂）	gtm-20
100 rxns（2.5毫升树脂）	gtm-100
200 rxns（5ml树脂）	GTM-200
400 rxns（10毫升树脂）	gtm-400
GFP-Trap®M试剂盒▶GFP-Trap®M▶包括裂解液，洗涤液和洗脱液	20 rxns（500µl树脂）	gtmk-20
GFP- MultiTrap®▶黑色96孔板	96 rxns（1个板）	gtp-96
480 rxns（5个板）	gtp-480
GFP-Trap®▶解偶联蛋白	250微升	gt-250
旋转柱	10台	sct-10
20伙	sct-20
50单位	sct-50
绑定控制▶琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	婴儿20
结合控制▶磁性琼脂糖珠	500µl（20 rxns）	单克隆抗体20
装订控制▶磁性粒子	500µl（20 rxns）	bmp-20
GFP抗体（3H9）▶大鼠单克隆	100微升	3H9

产品三：Chromobodies；ChromoTek公司的Chromobodies是一种新的极其微小的细胞内功能抗体。它是基于融合有荧光蛋白(e.g.Tag GFP or Tag RFPfromEvrogen)的来自羊骆抗体重链的抗原结合域结构(VHH)。和普通抗体不同的是，这些创新的荧光纳米探针可以使活细胞的结构和进程实时分析和可视化。因此，Chromobodies?是做研究细胞内研究包含高含量分析（HCA）的一种新的理想试剂。除了稳定细胞株，你也可以得到Chromobody?质粒，它允许你创建自己的细胞系或瞬时表达Chromobody?。所有Chromobody?结合域都是经过精心挑选，以不干扰内源性蛋白质的功能，并提供了独特的机会来标记活细胞中天然蛋白。产品形式：质粒或者细胞系产品。Chromobodies系列产品见下表：Actin Chromobody货号品名规格价格dcgDnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-GFP20μg14900dcrDnmt1-Chromobody?plasmid,αDnmt1-RFP20μg14900ccgCell Cycle Chromobody? plasmid αPCNA GFP20 μg14900ccrCell Cycle Chromobody? plasmid PCNA RFP20 μg14900lcgLamin Chromobody? plasmid, αLamin-GFP20 μg14900lcrLamin Chromobody? plasmid, αLamin-RFP20 μg14900acgActin Chromobody? plasmid, αActin-GFP20 μg14900acrActin Chromobody? plasmid, αActin-RFP20 μg14900产品系列四：ChromoTek推出一系列高质量常见抗体见下表：荧光标签抗体货号品名规格价格3f5RFP antibody mouse monoclonal100 μg39005f8RFP antibody rat monoclonal100 μg39003h9GFP antibody, rat monoclonal100 μg3900标签抗体货号品名规格价格6g9GST antibody, rat monoclonal100 μ l39006f7FLAG antibody, rat monoclonal100 μg39009E1c-Myc antibody, rat monoclonal100 μg39007c9HA antibody, rat monoclonal100 μg3900目的蛋白抗体货号品名规格价格2e8Dnmt1antibody,ratmonoclonal500μl49002e8tsDnmt1antibody,ratmonoclonal125μl200016d10PCNA antibody rat monoclonal100 μg490016d10tsPCNA antibody rat monoclonal25 μg20004b8Ago1 antibody, rat monoclonal100 μg54004b8tsAgo1 antibody, rat monoclonal25 μg200011a9Ago2 antibody, rat monoclonal100 μg540011a9tsAgo2 antibody, rat monoclonal25 μg20001c7RNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD5 ml54001c7tsRNA Pol II CTD, unphosphorylated CTD1 ml20003d12RNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 15 ml54003d12tsRNA Pol II CTD, phos. Tyrosine 11 ml20003e10RNA Pol II CTD, phos. Serine 25 ml54003e10tsRNA Pol II CTD, phos. Serine 21 ml20006d7RNA Pol II CTD, phos. Threonine 45 ml54006d7tsRNA Pol II CTD, phos. Threonine 41 ml20003e8RNA Pol II CTD, phos. Serine 55 ml54003e8tsRNA Pol II CTD, phos. Serine 51 ml20004e12RNA Pol II CTD, phos. Serine 75 ml54004e12tsRNA Pol II CTD, phos. Serine 71 ml2000ChromoTek GmbH开创了一类新的免疫学研究工具，该工具源自细胞生物学和蛋白质组学的单域骆驼抗体。ChromoTek成立于2008年，由Ulrich Rothbauer周边的一个研究团队从慕尼黑路德维希马克西米利安大学（LMU）分拆而来，现已迅速发展成为著名的创新试剂供应商和大型制药公司值得信赖的服务提供商。我们的管理团队结合了互补的技能和经验，形成了持续增长的基础。我们的使命是开发和商业化更好的工具，为我们的客户研究在世界各地。随着一系列产品和服务的开发，我们的愿景是成为蛋白质组学和活细胞成像领域最公认的领导者。ChromoTek的产品以专有的ChromoBody技术为中心。为此，创新的单域骆驼抗体片段要么与基质（纳米陷阱）、荧光染料（增强剂）结合，要么与荧光蛋白（染色体）融合，要么是用于研究蛋白质-蛋白质相互作用（F2H分析）的分析系统的一部分。它们体积小，稳定性高，是生物分子研究和活细胞分析的理想试剂。纳米陷阱（如GFP-Trap？、RFP-Trap？）在世界各地的数千个实验室中经常被用来从细胞提取物、膜或核制剂中提取标记蛋白及其相互作用伙伴。这些重组结合蛋白可快速、高效、可靠地分析和制备蛋白质的一步纯化，用于多种下游应用（Western Blot、ChIP、Mass spec等）。Booster®可通过在绿色荧光或红色荧光蛋白标签上附加稳定的化学荧光染料，在各种显微镜应用中增加荧光信号。它们的优点是提高了灵敏度，特别是在样品的光漂白是一个问题的情况下。在与荧光蛋白的基因融合中，染色体™在活细胞中起作用，在那里它们能实时检测和可视化内源性靶结构。我们利用了染色体的这一独特特征™除了染色体™基于生物传感器技术，我们开发了一种新的f2h检测方法™直接观察活细胞中蛋白质-蛋白质的相互作用。通过将荧光诱饵拴在一个特定的细胞结构上，我们产生了一个定位的蛋白质-蛋白质相互作用生物传感器，并分析了荧光被捕食蛋白在活细胞中的共定位。自动图像采集和分析使我们能够在细胞环境中实时地对干扰特定蛋白质-蛋白质相互作用的分子和药物进行高通量筛选。为了完善我们的产品组合，我们提供了一系列高质量的单克隆抗体

苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是专业从事生物技术产品销售的高科技企业，是国内生物试剂、仪器、消耗品领域的知名企业之一。起发公司自成立以来，连续2年高速成长。公司的发展目标是建成专业从事生物技术产品销售、生产与开发的一流公司。